SOX11 expresión es altamente específico …

SOX11 expresión es altamente específico ...

Abstracto

Fondo linfoma de células del manto ciclina D1-negativos es difícil de distinguir de otros linfomas de células B pequeñas. Las características clínicas y patológicas de los pacientes con esta forma de linfoma no han sido bien definidos. La sobreexpresión del factor de transcripción SOX11 se ha observado en el linfoma de células del manto convencional. El objetivo de este estudio fue determinar si este gen se expresa en la ciclina linfoma de células del manto D1-negativa y si su detección puede ser útil para identificar estos tumores.

Diseño y Métodos se volvió a examinar la base de datos de microarrays de 238 neoplasias de células B maduras. SOX11 expresión de la proteína fue investigado por inmunohistoquímica en 12 casos de ciclina D1 linfoma de células del manto-negativas, 54 casos de linfoma de células del manto convencional, y 209 neoplasias linfoides adicionales.

conclusiones SOX11 ARNm y la expresión de la proteína nuclear es un marcador muy específico tanto para el linfoma de células del manto positivos y negativos de ciclina D1.

Introducción

MCL ciclina D1-negativos parecen expresar altos niveles de ciclina D2 o D3 que, en algunos casos, están asociados con las translocaciones de estos genes.12 -14 Estos ciclinas también se expresan en niveles más bajos en otros linfomas de células B. SOX11. un factor de transcripción neural, se encontró que se expresa en niveles más altos en las células MCL leucémicas que en células B naive y otros lymphomas.15 de células B, 16 la expresión nuclear de la proteína se ha identificado en MCL convencional pero no en otras neoplasias linfoides. 16, 17 Por lo tanto, la presencia de SOX11 puede ser un identificador útil de la ciclina D1-MCL negativo. Sin embargo, el espectro de neoplasias linfoides en estudios anteriores era limitado y no se incluyeron los casos reales de MCL negativos para la ciclina D1 y 11q13 reordenamientos. El objetivo de nuestro estudio fue, por lo tanto, para confirmar la expresión específica de SOX11 en MCL y definir su valor como biomarcador para identificar la ciclina D1-MCL negativo.

Diseño y Métodos

La selección de casos

expresión de la proteína nuclear SOX11 en neoplasias linfoides.

Microarrays de perfiles de expresión génica

mapa de calor que representa los valores de expresión génica para SOX11, la ciclina D1 (CCND1), ciclina D2 (CCND2) y ciclina D3 (CCND3). Los casos de MCL, incluidos CCND1 -MCL negativos se muestran en la mitad superior, mientras que otras neoplasias linfoides se muestran en la mitad inferior.

La inmunohistoquímica

SOX11 expresión de la proteína se estudió en microarrays de tejidos y cortes de tejidos enteros. secciones de tejido incluidas en parafina fijadas con formalina se tiñeron para SOX11 (1: 100; Los anticuerpos del Atlas, Estocolmo, Suecia), ciclina D1 (1: 100; Thermo Fisher Scientific, Runcorn, Reino Unido), ciclina D2 (1: 100) y ciclina D3 (1:50) (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, EE.UU.) en la plataforma automatizada BondMax (VisionBiosystems, Mount Waverley, Victoria, Australia). Se utilizó la recuperación inducida por calor con la solución tampón ER2 BondMax durante 15 minutos y se detectó positividad con un polímero unido a peroxidasa de rábano picante para 8 min (Definir; Vision Biosystems) y 5 ‘3-‘ diaminobencidina para 10 min.

reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa

Quantitative análisis RT-PCR de SOX11 la expresión de ARNm en el linfoma de células del manto (MCL), linfoma de Burkitt (BL) y otras neoplasias linfoides (Otros).

El uso de PCR cuantitativa, se analizó tejido congelado obtenido de nueve pacientes con MCL, cinco con DLBCL, dos con leucemia linfocítica crónica, una con FL, dos con linfoma de la zona marginal esplénica (MZL), dos con nodal MZL, uno con MALT MZL y tres con BL. Por otra parte, hemos realizado un estudio de diez ciclina D1-positivos y cinco ciclina D1-negativos MCL usando tejido incluido en parafina y fijado en formalina.

Hibridación in situ fluorescente

fluorescencia de interfase en el lugar hibridación de análisis (FISH) se realizó en secciones de tejido incluidas en parafina fijadas con formalina. los CCND1 reordenamiento se estudia con un color dual sonda separables (código de Dako, Dinamarca Y5414). CCND2 y CCND3 reordenamientos se estudiaron utilizando sondas de translocación no comerciales separables de doble color. los CCND2 sonda consistía en dos clones de cromosoma artificial bacteriano (BAC) marcadas directamente utilizando traslado de cortes. BAC RP11-578L13 situada en el extremo 5 ‘del gen fue etiquetada en verde y BAC RP11-388F6 situada en el extremo 3’ del gen se marcó en red.9

SOX11 expresión de la proteína en el LCM convencional y ciclina D1-negativos. (A, D ) MCL convencional y ciclina D1-negativos, respectivamente (Hematoxilina & eosina; x400); (B, E ) Ciclina D1 y (C, F ) SOX11 expresión en MCL D1-negativos convencional y ciclina, respectivamente (inmunohistoquímica; x200);

análisis estadístico

Se utilizó la prueba χ 2 para evaluar los diferentes niveles de expresión SOX11. Los resultados cuantitativos de RT-PCR de SOX11, ciclina D1, D2 y D3 niveles de expresión se compararon mediante la prueba de Mann-Whitney. pag valores de menos de 0,05 se consideraron estadísticamente significativos. Las pruebas estadísticas se realizaron utilizando el software SPSS v14 (SPSS, Chicago, IL, EE.UU.).

resultados

SOX11 expresión de ARNm en los linfomas de células B

SOX11 expresión de la proteína en el linfoma de células del manto y otra linfoma no Hodgkin

Curiosamente, el cinco de células T y las células B de leucemia / linfoma linfoblástico mostraron una fuerte expresión nuclear SOX11. En particular, uno de los casos de linfoma de Hodgkin clásico, dos de ocho BL y dos de los tres leucemias prolinfocítica de células T también fueron positivos. linfoma El restante de Hodgkin, T y linfomas de células B, incluyendo dos mieloma múltiple con t (11; 14) y la expresión de ciclina D1 fueron negativos o sólo mostraron una tinción punteado citoplásmica (Tabla 1. Figura 4).

También se examinó la expresión de SOX11 en muestras de ganglios linfáticos y el bazo amígdalas reactivos. No se observó expresión nuclear en cualquier compartimiento de linfocitos. Sólo tinción citoplásmica se observó en las células de los centros germinales reactivos.

SOX11 tinción nuclear se observa en el linfoma y linfoma de células T prolinfocítica de Burkitt, pero tinción citoplasmática es única en el linfoma folicular y linfoma difuso de células B grandes. (A, B ) El linfoma de Burkitt; (DISCOS COMPACTOS ) Linfoma de células T prolinfocítica; (E, F ) Linfoma folicular; (G, H ) Linfoma difuso de células B grandes.

SOX11 expresión en el linfoma de células del manto ciclina D1-negativos

Las características clínicas y patológicas de la ciclina D1 linfoma de células del manto negativo

Las características clínicas de los 12 pacientes con ciclina D1-negativos MCL se resumen en la Tabla 2. Nueve pacientes fueron varones y la edad media de los 12 pacientes fue de 60 años (rango, 39-70 años). No se observaron síntomas B en cinco pacientes (46%). La linfadenopatía generalizada fue la forma más común de presentación y sitios extranodales estuvieron involucrados en diez pacientes (83%), la médula ósea es el sitio más común (67%). Los niveles séricos de lactato deshidrogenasa se elevaron en cuatro pacientes (36%). Todos los pacientes recibieron diferentes tratamientos quimioterapéuticos. Caso 1 recaída de sangre periférica, médula ósea y el colorrectal 26 meses después del diagnóstico inicial y la caja 12 con la participación de próstata recidivante 12 meses después del diagnóstico inicial. Después de una mediana de seguimiento de los pacientes supervivientes de 38 meses (rango, 37-60 meses), ocho pacientes habían muerto de linfoma progresivo y cuatro pacientes estaban vivos con la enfermedad.

FISH análisis de ciclina D1 MCL-negativo. (UN ) CCND1 separables sonda que muestra dos señales de fusión de cada celda; (segundo ) CCND2 la sonda que muestra un patrón de señal de división que sugiere un reordenamiento del gen.

expresión de la proteína ciclina D2 en D1-negativos MCL convencional y ciclina y en varias neoplasias linfoides. (A, B ) MCL convencional; (DISCOS COMPACTOS ) MCL ciclina D1-negativos; (E, F ) Linfoma de linfocitos pequeños; (G, H ) Linfoma folicular; (I, J ) El linfoma esplénico de la zona marginal.

Discusión

El diagnóstico diferencial entre la ciclina D1-negativos MCL y otros linfomas de células B pequeñas puede ser difícil. Morfológicamente la característica núcleos irregular de MCL se puede observar en algunos casos de leucemia linfocítica crónica (LLC) 21 o linfoma de la zona marginal (MZL) 0,22 CD23 se expresa en la LLC, sino también en casos ocasionales de MCL.23 Por otro lado, CD5 y la expresión de CD43, una característica común de MCL y CLL también puede ocurrir en MZL.24 por último, a pesar de CD10 o Bcl-6 no se han detectado en el LCM ciclina D1-negativos algunos MCL convencional puede expresar estos germinal markers.25 central, 26 en En este contexto, los nuevos biomarcadores y fiables son de suma importancia.

Estos resultados nos llevó a investigar la expresión SOX11 en nuestra ciclina D1 MCL-negativo. Curiosamente, todos ellos mostraron una fuerte expresión de la proteína nuclear SOX11 que indica que este hecho puede ser un marcador útil para identificar estos tumores. Ek correot col .16 incluía un caso de MCL aparentemente ciclina D1-negativos en su serie. Sin embargo, este caso tenía una t (11; 14) de translocación y, por lo tanto, la falta de detección de la ciclina D1 fue probablemente la consecuencia de un problema técnico. Esta observación sugiere que SOX11 también puede ser un marcador fiable para el diagnóstico de MCL convencional cuando la detección de la ciclina D1 no por razones técnicas.

En conclusión, hemos confirmado la alta especificidad de SOX11 mRNA y expresión de la proteína nuclear como marcadores de MCL. La detección de este factor de transcripción es un biomarcador útil para identificar cierto ciclina D1 MCL-negativas. Aunque SOX11 también se puede detectar en algunas BL, LBL y T-PLL, las diferentes características morfológicas y fenotípicas de estas malignidades permiten un fácil reconocimiento de los casos de MCL ciclina D1-negativos.

AGRADECIMIENTOS

Notas al pie

Autoría y Revelaciones

AM y CR llevan a cabo la investigación, la recopilación, análisis e interpretación de datos y redactó el manuscrito, contribuyeron igualmente a la misma; EH, DJ, DW, JD, S-SC, ESJ, CR-M, KF, AR, DC y AL-G recogido e interpretado los datos. CB, AV, FS, SD, LR, RB, RDG y LMS realizaron la investigación e interpretado los datos; GO, PJ y CE de investigación diseñado, analizado e interpretado los datos, redactó el manuscrito y son co-autores de alto nivel.

Los autores no informaron los posibles conflictos de interés.

  • Recibió el 16 abril, 2009.
  • Revisión recibía el 15 mayo, 2009.
  • Aceptado el 19 de mayo, 2009.
  • Derechos de autor © Fundación Ferrata Storti

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SOX11 expresión es altamente específico para el linfoma de células del manto e identifica el subtipo D1-negativos de ciclina

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Ana Mozos. Cristina Royo. Elena Hartmann. Daphne De Jong. Cristina Baró. Alexandra Valera. Kai Fu. Dennis D. Weisenburger. Ene Delabie. Shih-Sung Chuang. Elaine S. Jaffe. Carmen Ruiz-Marcellan. Sandeep de Dave. Lisa Rimsza. Rita Braziel. Randy D. Gascoyne. Francisco Solé. Armando López-Guillermo. Dolors Colomer. Louis M. Staudt. Andreas Rosenwald. Ott alemán. Pedro Jares. Elías Campo

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